BN電泳介紹及參考文獻

溫和膠，簡(jiǎn)寫(xiě)為BN-PAGE（Blue Native PAGE），由Sch?gger等建立的一種電泳系統，最初被用來(lái)分離牛心臟組織中線(xiàn)粒體上的蛋白質(zhì)復合體。由于在研究蛋白復合體上的優(yōu)勢，BN-PAGE被用于線(xiàn)粒體膜、類(lèi)囊體膜、質(zhì)膜等膜蛋白復合體的研究。在做植物類(lèi)囊體膜的電泳時(shí)，結合葉綠素的蛋白質(zhì)復合物呈綠色，而不含葉綠素的呈藍色，因此又稱(chēng)之為藍綠溫和膠電泳。

Blue Native PAGE是最古老的Native-PAGE技術(shù)。在電泳緩沖液和上樣緩沖液中加入了考馬斯亮藍G-250，蛋白質(zhì)表面結合了大量的考馬斯亮藍染料而帶上負電荷，這會(huì )導致即使堿性蛋白（pI高于7的蛋白）也會(huì )向陰極遷移。

Blue Native PAGE在分析蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用以及膜蛋白復合物方面有很大的優(yōu)勢，其分離范圍在100KDa-10MDa。這種方法的缺點(diǎn)是：考馬斯亮藍與蛋白的結合起到了去垢劑的作用，可能導致復合物的分離；并對化學(xué)發(fā)光或蛋白質(zhì)輔基的熒光或熒光染料的標記具有潛在的猝滅作用。

Clear Native PAGE是另外一種電泳技術(shù)，這是BN-PAGE之后出現的一種技術(shù)?？梢苑蛛x聚丙烯酰胺凝膠（PI小于7）中的酸性水溶性蛋白和膜蛋白。分辨率通常低于BN-PAGE。但是，當考馬斯亮藍G-250染料妨礙進(jìn)一步分析時(shí)，CN-PAGE具有優(yōu)勢。例如，為了測量催化活性（例如線(xiàn)粒體ATP合酶）或分離痕量的膜蛋白以進(jìn)行熒光共振能量分析，CN-PAGE比BN-PAGE更溫和。 CN-PAGE可以維持膜蛋白的超分子組裝，而BN-PAGE的結構會(huì )引起分解?？梢酝ㄟ^(guò)CN-PAGE檢測線(xiàn)粒體ATPase中具有酶促活性的寡聚體，但使用BN-PAGE則不能檢測。由于CN-PAGE中沒(méi)有帶電的染料，因此蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移完全取決于蛋白質(zhì)的固有電荷，等電點(diǎn)低于7的酸性蛋白才能帶上負電荷正常電泳。優(yōu)點(diǎn)是條件相對溫和，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中具有很大的優(yōu)勢。 BN-PAGE和CN-PAGE的制膠緩沖液與電泳條件相同，但是CN-PAGE的陰極緩沖液（內槽緩沖液）不含考馬斯染料，但將0.025％的洋地黃皂苷添加到了凝膠中。

1 Blue native PAGE

Hermann Schagger在Nature Protocol上的經(jīng)典方法。凝膠緩沖液使用咪唑配方。

2 Blue Native electrophoresis to study mitochondrial and other protein complexes

凝膠緩沖液使用Bis-Tris配方。

相關(guān)產(chǎn)品：RTD6139-0312 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型板3-12%預制膠，通用型)

          RTD6139-0420 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型板4-16%預制膠，通用型)
3 Advantages and limitations of clear-native PAGE

Hermann Schagger CN-PAGE的優(yōu)缺點(diǎn)

4 BN系統非梯度凝膠（手灌膠） Non-Gradient Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis
相關(guān)產(chǎn)品：RTD6140 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(手灌膠)

BN電泳在更換為無(wú)色電泳緩沖液后，電流基本在2-5mA，有些電泳電源如伯樂(lè )電源有負載檢查功能，電流過(guò)低（低于4mA） 會(huì )認為沒(méi)有負載，報錯E1錯誤代碼，終止電泳。解決方法是更換電泳電源，如使用國產(chǎn)電源；另外可以調高電壓高于300V，使得電流不要低于4mA。