細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

●  產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(Apoptosis and Necrosis Assay Kit)可以快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)雙染的方法。細胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì )固縮。Hoechst 33342可以穿透細胞膜，染色后凋亡細胞熒光會(huì )比正常細胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能穿透細胞膜，對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。而對于壞死細胞，其細胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細胞。上述兩種染料雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測時(shí)，正常細胞為弱紅色熒光＋弱藍色熒光，凋亡細胞為弱紅色熒光＋強藍色熒光，壞死細胞為強紅色熒光＋強藍色熒光。

按照每個(gè)樣品細胞數量100萬(wàn)計算，該試劑盒可以使用100次。

● 貯存：

避光按照標簽溫度保存，一年有效。

● 操作步驟：

一. 貼壁細胞：

1.1在培養液中（細胞數量控制在10⁶以?xún)龋┚鶆虻渭舆m量的Hoechst 33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養液中的血清、酚紅等都不會(huì )對染色產(chǎn)生干擾。

1.2混勻，37℃培養15分鐘，直接在顯微鏡下觀(guān)察；如果考慮到液體對拍照的乙酰個(gè)，可以吸除含染料的培養液，用染色緩沖液洗滌2-3次即可在熒光顯微鏡下觀(guān)察。

注：為避免凋亡細胞隨培養液或染色緩沖液被吸除，在吸除液體前，對于用多孔板中培養的細胞，最好用多孔板離心機離心一下以充分沉淀那些已經(jīng)漂浮起來(lái)的凋亡細胞。

二. 懸浮細胞：

2.1 在懸浮細胞培養液中加入適量的Hoechst 33342染色液和PI染色液，輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養的懸浮細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養液中的血清、酚紅等都不會(huì )對染色產(chǎn)生干擾。

2.2混勻，37℃培養15分鐘，將細胞轉移到1.5 ml離心管中，500 g 離心5分鐘收集細胞。

2.3細胞沉淀用細胞染色緩沖液洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。

2.4細胞沉淀中加入100 μl 細胞染色緩沖液，重懸沉淀。

2.5取5 μl抗熒光淬滅封片液于載玻片上，加入等體積步驟2.4染色后細胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

2.6 熒光顯微鏡下觀(guān)察。

注：熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡快檢測。

實(shí)驗示例：

293 細胞Hoechst/PI雙染檢測

 操作程序：293細胞胰酶消化后調整細胞密度為1×10⁵/ml。接種到12孔板，1ml每孔，37度5%二氧化碳培養40小時(shí)，加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl 碘化丙啶染色液，37度培養15分鐘，熒光顯微鏡觀(guān)察（40×）。