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首頁(yè) > 蛋白生物學(xué) > 蛋白電泳試劑盒 > Tris甘氨酸電泳

RealPAGE 彩色PAGE凝膠快速制備試劑盒(一步法)12.5%

RealPAGE 彩色PAGE凝膠快速制備試劑盒(一步法)12.5%

產(chǎn)品編號:RTD6134-R

產(chǎn)品規格:12.5%紅

相關(guān)規格:
數量
價(jià)格 ¥320
RealPAGE®彩色PAGE凝膠快速制備試劑盒(一步法)

Ver.750872-1.0

 RealPAGE® One-Step Colour PAGE Gel Fast Preparation Kit

  稱(chēng)

可制膠數量

RTD6134-Y

制備6%PAGE膠,黃色上層膠

125 0.75 mm

901.0 mm

601.5 mm

RTD6134-G

制備7.5%PAGE膠,綠色上層膠

RTD6134-B

制備10%PAGE膠,藍色上層膠

RTD6134-R

制備12.5%PAGE膠,紅色上層膠

RTD6134-V

制備15%PAGE膠,紫色上層膠

●  貨品內容:

組份

名稱(chēng)

規格

1

上層膠溶液(2×)

80 ml

2

上層膠緩沖液(2×)

80 ml

3

下層膠溶液(2×)

250 ml

4

下層膠緩沖液(2×)

250 ml

5

改良型促凝劑

10 ml

6

刻度配膠杯

6個(gè)

7

說(shuō)明書(shū)

一份

● 運輸、貯存及效期:

本產(chǎn)品常溫運輸;4-8℃貯存,其中配制后的改良型促凝劑貯存于-20℃;有效期一年。

產(chǎn)品特點(diǎn):

快速制備凝膠:無(wú)需液封等待下層膠凝固,即可直接灌注上層膠,制膠更省時(shí);

彩色上層膠:可制備五種顏色的上層膠,為點(diǎn)樣和區分不同凝膠提供便利;

避免異味:無(wú)需使用 TEMED,環(huán)境安全友好;

凝膠高穩定性:中性pH凝膠,有效提高凝膠穩定性,密封條件下,凝膠可以四度貯存6個(gè)月。

兼容性廣:制膠溶液中不含SDS,可用于非變性電泳(Native-PAGE)。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

該產(chǎn)品利用聚丙烯酰胺凝膠電泳原理,采用上層膠和下層膠的預混配方,只需加入改良型促凝劑即可凝膠,灌入下層膠后,無(wú)需等待凝膠,直接灌入上層膠即可,簡(jiǎn)便快捷可在15分鐘內配制得到高質(zhì)量的聚丙烯酰胺凝膠,可用于變性和非變性蛋白凝膠電泳,適用于Tris-甘氨酸電泳體系(Laemmli體系)。五種上層膠顏色設計,點(diǎn)樣孔清晰易辨,方便點(diǎn)樣,可以配制6%(黃色上層膠)、7.5%(綠色上層膠)、10%(藍色上層膠)、12.5%(紅色上層膠)和15%(紫色上層膠)的分離膠濃度,可以滿(mǎn)足絕大多數蛋白電泳需求。

本產(chǎn)品配套提供改良型促凝劑 ,其具有更好的穩定性和催化效能,配膠過(guò)程中無(wú)需額外添加TEMED。為方便操作,已開(kāi)蓋使用中的改良型促凝劑,可置于 4℃保存至少三個(gè)月。

本試劑盒大約可以配制60-125塊常規大?。?×10 cm)的PAGE凝膠,具體數量根據凝膠厚度決定:0.75 mm厚度凝膠可以配制125塊膠,1.0 mm厚度凝膠可以配制至少90塊膠,1.5 mm厚度凝膠可以配制至少60塊膠。

使用說(shuō)明:

. 制膠前的準備:

1.1     即用型改良型促凝劑配制:

試劑盒提供的改良型促凝劑為干粉,第一次使用前加入10 ml超純水,徹底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝劑置于4℃備用,長(cháng)期不用建議-20℃貯存。

1.2     推薦操作:

實(shí)驗前半小時(shí),取出試劑盒所有組份,常溫靜置半小時(shí)使溶液恢復到常溫后輕柔混勻后使用,可以有效降低制膠時(shí)產(chǎn)生氣泡的可能性。

. 凝膠配制(以一塊0.75/1.0/1.5 mm厚度的8×10cm膠為例)

2.1取等體積彩色上層膠緩沖液和上層膠溶液,各0.5/0.75/1.0 ml,混勻;

注:由于染料的特殊理化性質(zhì),彩色上層膠緩沖液使用前請搖勻。

2.2取等體積下層膠緩沖液和下層膠溶液,各2.0/2.5/4.0 ml,混勻;

2.3 向步驟2.1的上層膠混合溶液中加入10/15/20 μl改良型促凝劑,輕輕混勻。

注:加入改良型促凝劑后,需輕柔混勻,防止過(guò)多氧氣混入膠溶液,抑制凝膠聚合和導致凝膠內可能產(chǎn)生氣泡。

2.4 向步驟2.2的下層膠混合溶液中加入40/50/80 μl改良型促凝劑,輕輕混勻;將溶液注入制膠玻璃板中,使液面和短玻璃板上沿之間的距離為約1.5 cm或距離梳齒下沿距離為約0.5 cm即可;

注:此溶液為過(guò)量,請勿全部注入,可留少許于制膠杯中,便于判斷凝膠狀態(tài);加入改良型促凝劑后,需輕柔混勻,防止過(guò)多氧氣混入膠溶液,抑制凝膠聚合和導致凝膠內可能產(chǎn)生氣泡。

2.5 無(wú)需等待下層膠凝固,迅速將步驟2.3的上層膠混合溶液左右平移緩慢輕柔注入制膠玻璃板中,插入梳齒。

注:加入下層膠混合液后,請在1-2分鐘內灌注上層膠混合溶液,加入時(shí)一定要輕緩,避免將上層膠溶液沖入下層膠;凝固后上下層膠分界線(xiàn)平整度略弱于使用封閉方法配制的凝膠,但對后續電泳沒(méi)有影響。

2.6 待膠凝固后拔去梳齒,用注射器或槍頭吸取電泳緩沖液將加樣孔沖洗干凈,即可進(jìn)行常規電泳操作。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì )延長(cháng)。

溫度與凝膠時(shí)間參考表

環(huán)境溫度

18

25

37

凝固時(shí)間

~20 min

~15 min

~10 min


附:凝膠配方表

表一  彩色上層膠配方

表二 下層膠配方

膠厚度

彩色上層膠緩沖液

上層膠溶液

促凝劑

膠厚度

下層膠緩沖液

下層膠溶液

促凝劑

0.75 mm

0.5 ml

0.5 ml

10 μl

0.75 mm

2.0 ml

2.0 ml

40 μl

1.0 mm

0.75 ml

0.75 ml

15 μl

1.0 mm

2.5 ml

2.5 ml

50 μl

1.5 mm

1.0 ml

1.0 ml

20 μl

1.5 mm

4.0 ml

4.0 ml

80 μl

. 電泳:

3.1 變性電泳:

電泳緩沖液

5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液

上樣緩沖液

5×蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

電泳條件

恒壓 200 V  40-55 min

3.2 非變性電泳:

電泳緩沖液

5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液

上樣緩沖液

5×蛋白上樣緩沖液(非變性,非還原)

電泳條件

恒壓150 V  50-65 min

非變性電泳必看:該凝膠體系pH大約8左右,適用于等電點(diǎn)pI小于8的蛋白電泳分離,pI越遠離8,帶的負電荷越多,分離就更容易;等電點(diǎn)接近8或者高于8的蛋白不適合用該系統進(jìn)行非變性電泳。

. 凝膠染色或轉膜:

4.1 凝膠染色可以選擇FastBlue蛋白快速染色液(貨號:RTD6202), 可以在30分鐘內完成染色和脫色,也可以選擇常規法考馬斯亮藍蛋白染色液(貨號:RTD6203)。

4.2 轉膜緩沖液可以使用濕轉法或半干轉方法轉膜。濕轉法可以使用經(jīng)典Tris-甘氨酸轉膜緩沖液(貨號:TB1040)或者使用10×RealBlot快速轉膜液(貨號:RT5020)。半干轉轉膜可以使用5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液(貨號:RT5030)。


. 凝膠濃度選擇參考:

目的蛋白分子量

下層膠濃度

壓縮前沿

10 kD以下

15%

~6 kD

10-45 kD

12.5%

~10 kD

45-100 kD

10%

~15 kD

100-180 kD

10%/7.5%

~15 kD/~25 kD

180-250 kD

7.5%

~25 kD

250 kD以上

6%

~60 kD


上圖為 Tris-甘氨酸緩沖系統中,蛋白分子量標準 (10-180 kDa,含有 10 條蛋白條帶 ) 在不同濃度的 SDS-PAGE凝膠中的分離示意圖。因溫度、pH 值等因素不同,實(shí)際分離情況會(huì )略有出入,本圖僅供參考。





 
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